hepatoАнналы хирургической гепатологииAnnaly khirurgicheskoy gepatologii = Annals of HPB Surgery1995-54642408-9524НЭИКОН ИСП10.16931/1995-5464.2018-1-88-95hepato-283Research ArticleПЕЧЕНЬLIVERВлияние биологической комбинации (экстракт из растущей печени) на культуры клеток различного происхожденияEffect of Growing Liver Biological Set on Various Cellular CulturesДюжеваТ. Г.DyuzhevaT. G.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, Российская Федерация

доктор мед. наук, профессор, заведующая отделом регенеративной хирургии печени и поджелудочной железы Института регенеративной медицины ФГАОУ ВО  Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ (Сеченовский Университет)

8-2, Trubetskaya str., Moscow 119991, Russian Federation

Doct. of Med. Sci., Professor, Head of Regenerative Liver and Pancreatic Surgery Department, Regenerative Medicine Institute, Sechenov First Moscow State Medical University

КовинаМ. В.KovinaM. V.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, Российская Федерация

Тел.: 8-963-623-90-42

канд. биол. наук, старший научный сотрудник отдела регенеративной хирургии печени и поджелудочной железы Института регенеративной медицины ФГАОУ ВО  Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ (Сеченовский Университет)

8-2, Trubetskaya str., Moscow 119991, Russian Federation

Phone: +7-963-623-90-42

Cand. of Biol. Sci., Senior Researcher of Regenerative Liver and Pancreatic Surgery Department, Regenerative Medicine Institute, Sechenov First Moscow State Medical University

gershi2001@yahoo.comПлатоноваЛ. В.PlatonovaL. V.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, Российская Федерация

канд. биол. наук, ведущий научный сотрудник отдела регенеративной хирургии печени и поджелудочной железы Института регенеративной медицины  ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ (Сеченовский  Университет)

8-2, Trubetskaya str., Moscow 119991, Russian Federation

Cand. of Biol. Sci., Leading Researcher of Regenerative Liver and Pancreatic Surgery Department, Regenerative Medicine Institute, Sechenov First Moscow State Medical University

ЛюндупА. В.LyundupA. V.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, Российская Федерация

канд. мед. наук, заведующий отделом передовых клеточных технологий Института регенеративной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова  Минздрава РФ (Сеченовский Университет)

8-2, Trubetskaya str., Moscow 119991, Russian Federation

Cand. of Med. Sci., Head of Advanced Cell Technologies Department of Regenerative Medicine Institute, Sechenov First Moscow State Medical University

КуимовА. Н.KuimovA. N.

119899, г. Москва, ул. Воробьевы Горы, МГУ, Российская Федерация

канд. биол. наук, старший научный сотрудник НИИ ФХБ им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова

Vorobyovy Gory, MGU, Moscow, 119899, Russian Federation

Cand. of Biol. Sci., Senior Researcher of Belozersky Institute of Physico-Chemical Biology, Lomonosov Moscow State University

КлабуковИ. Д.KlabukovI. D.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, Российская Федерация

научный сотрудник отдела передовых клеточных технологий Института регенеративной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ (Сеченовский Университет)

8-2, Trubetskaya str., Moscow 119991, Russian Federation

Researcher of Advanced Cell Technologies Department, Sechenov First Moscow State Medical University

ГаоС.GaoXu

Харбин, Китай

доктор медицины, профессор, Харбинский медицинский университет

Harbin, China

PhD, Professor, Harbin Medical University

БалясинМ. В.BalyasinM. V.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, Российская Федерация

лаборант отдела передовых клеточных технологий Института регенеративной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ  (Сеченовский Университет)

8-2, Trubetskaya str., Moscow 119991, Russian Federation

laboratory assistant of Advanced Cell Technologies Department, Sechenov First Moscow State Medical University

ГальперинЭ. И.GalperinE. I.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, Российская Федерация

доктор мед. наук, профессор, почетный профессор ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ (Сеченовский Университет)

8-2, Trubetskaya str., Moscow 119991, Russian Federation

Doct. of Med. Sci., Professor, Honorary Professor of Sechenov First Moscow State Medical University

ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава РФ (Сеченовский Университет) Институт регенеративной медициныРоссияSechenov First Moscow State Medical University of Healthcare Ministry of the Russian Federation Regenerative Medicine InstituteRussian FederationНИИ ФХБ имени А.Н. Белозерского МГУ имени М.В. ЛомоносоваРоссияBelozersky Institute of Physico-Chemical Biology Lomonosov Moscow State UniversityRussian FederationХарбинский медицинский университетКитайHarbin Medical UniversityChina2018100420182318895Copyright © Дюжева Т.Г., Ковина М.В., Платонова Л.В., Люндуп А.В., Куимов А.Н., Клабуков И.Д., Гао С., Балясин М.В., Гальперин Э.И., 20182018Дюжева Т.Г., Ковина М.В., Платонова Л.В., Люндуп А.В., Куимов А.Н., Клабуков И.Д., Гао С., Балясин М.В., Гальперин Э.И.Dyuzheva T.G., Kovina M.V., Platonova L.V., Lyundup A.V., Kuimov A.N., Klabukov I.D., Gao X., Balyasin M.V., Galperin E.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://hepato.elpub.ru/jour/article/view/283Цель

Цель. Изучить влияние экстракта, полученного из растущей печени, на жизнеспособность и пролиферативную активность различных типов клеток в культуре.

Материал и методы

Материал и методы. Биологическая комбинация представляет собой экстракт, полученный из растущей печени по разработанной оригинальной методике. Исследовано влияние  экстракта на следующие клеточные линии: гепатокарциному Huh7, мышиные L- фибробласты, мезенхимальные стволовые клетки костного мозга мыши. Жизнеспособность и пролиферативную активность оценивали по окрашиванию клеток трипановым синим и визуальному подсчету клеток при световой фазовоконтрастной микроскопии.

Результаты

Результаты. Биологическая комбинация, полученная из растущей печени неонатального поросенка, дозозависимо защищает клетки гепатоцитарного происхождения от депривации  фетальной сыворотки, в присутствии сыворотки стимулирует рост клеток. Высокая  концентрация экстракта не приводит к ростовому аресту линии гепатоцитарного  происхождения. В то же время экстракт является цитостатиком (или цитотоксином) для мышиных L-фибробластов. Выявлен ограниченный защитный эффект экстракта  относительно депривации сыворотки при действии на стволовые клетки из костного мозга мыши.

Заключение

Заключение. Результаты исследования позволяют рассматривать выделенный экстракт в качестве возможного регулятора репаративной регенерации печени, оказывающего  защитный и/или стимулирующий эффект на клетки гепатоцитарного происхождения (Huh7),  мезенхимальные стволовые клетки костного мозга мыши и цитостатический эффект на  основные продуценты фиброзной ткани – фибробласты. Это является основанием для проведения дальнейших исследований.

Aim

Aim. To analyze the effect of growing liver biological set on viability and proliferative activity of various cellular cultures in vitro.

Material and Methods

Material and Methods. The biological combination is an extract from the growing liver obtained by using of original technique. We  have assessed extract’s effect on the following cellular lines: hepatic  carcinoma Huh7, L-fibroblasts of mice, murine bone marrow  mesenchymal stem cells. Viability and proliferative activity were  assessed by staining the cells with trypan blue and visual counting of cells under phase contrast microscopy.

Result

Result. Biological combination from neonatal piglet’s growing liver dose-dependently protects hepatocyte-like cells from deprivation of  fetal serum and stimulates cellular growth in presence of serum.  High concentrations of HRS do not lead to growth arrest of the Huh7  cells. At the same time, it is a cytostatic (or cytotoxic) for murine L- fibroblasts. Limited protective effect of the combination on the  deprivation of serum when exposed to bone marrow stem cells was revealed.

Conclusion

Conclusion. Our data show that the extract may be considered as an important regulator of reparative regeneration of liver with  protective and/or stimulating effect on mesenchymal stem and  hepatic-like cells and cytostatic effect on fibroblasts. So, further trials are necessary.

мезенхимальные стволовые клеткифибробластыбессывороточная средастимулятор регенерациирегенерация печениростовой арестmesenchymal stem cellsfibroblastsserum-free mediumregeneration stimulatorhepatic regenerationgrowing arrest.ReferencesKim R.D., Kim J.S., Watanabe G., Mohuczy D., Behrns K.E. Liver regeneration and the atrophy-hypertrophy complex. Semin. Intervent. Radiol. 2008; 25 (2): 92–103. DOI: 10.1055/s-2008-1076679.Kim R.D., Kim J.S., Watanabe G., Mohuczy D., Behrns K.E. Liver regeneration and the atrophy-hypertrophy complex. Semin. Intervent. Radiol. 2008; 25 (2): 92–103. DOI: 10.1055/s-2008-1076679.Fürst G., Schulte am Esch J., Poll L.W., Hosch S.B., Fritz L.B., Klein M., Godehardt E., Krieg A., Wecker B., Stoldt V., Stockschläder M., Eisenberger C.F., Mödder U., Knoefel W.T. Portal vein embolization and autologous CD133+ bone marrow stem cells for liver regeneration: initial experience. Radiology. 2007; 243 (1): 171–179. DOI: 10.1148/radiol.2431060625.Fürst G., Schulte am Esch J., Poll L.W., Hosch S.B., Fritz L.B., Klein M., Godehardt E., Krieg A., Wecker B., Stoldt V., Stockschläder M., Eisenberger C.F., Mödder U., Knoefel W.T. Portal vein embolization and autologous CD133+ bone marrow stem cells for liver regeneration: initial experience. Radiology. 2007; 243 (1): 171–179. DOI: 10.1148/radiol.2431060625.Serenari M., Cescon M., Cucchetti A., Pinna A.D. Liver function impairment in liver transplantation and after extended hepatectomy. World J. Gastroenterol. 2013; 19 (44): 7922–7929. DOI: 10.3748/wjg.v19.i44.7922.Serenari M., Cescon M., Cucchetti A., Pinna A.D. Liver function impairment in liver transplantation and after extended hepatectomy. World J. Gastroenterol. 2013; 19 (44): 7922–7929. DOI: 10.3748/wjg.v19.i44.7922.Moris D., Vernadakis S., Papalampros A., Vailas M., Dimitrokallis N., Petrou A., Dimitroulis D. Mechanistic insights of rapid liver regeneration after associating liver partition and portal vein ligation for stage hepatectomy. World J. Gastroenterol. 2016; 22 (33): 7613–7624. DOI: 10.3748/wjg.v22.i33.7613.Moris D., Vernadakis S., Papalampros A., Vailas M., Dimitrokallis N., Petrou A., Dimitroulis D. Mechanistic insights of rapid liver regeneration after associating liver partition and portal vein ligation for stage hepatectomy. World J. Gastroenterol. 2016; 22 (33): 7613–7624. DOI: 10.3748/wjg.v22.i33.7613.LaBrecque D.R., Pesch L.A. Preparation and partial characterization of hepatic regenerative stimulator substance (SS) from rat liver. J. Physiol. 1975; 248 (2): 273–284. DOI: 10.1113/jphysiol.1975.sp010973.LaBrecque D.R., Pesch L.A. Preparation and partial characterization of hepatic regenerative stimulator substance (SS) from rat liver. J. Physiol. 1975; 248 (2): 273–284. DOI: 10.1113/jphysiol.1975.sp010973.Gal’perin E.I., Platonova L.V., Shono N.I., Chevokin A.Y., Sakevarashvili G.R., Abakumova O.Y., Tsvetkova T.A., Kondakova L.I. Thermostable hepatocyte growth factor and energy metabolism in rats after partial hepatectomy. Bull. Exp. Biol. Med. 1999; 127 (1): 47–49. DOI: 10.1007/BF02432798.Gal’perin E.I., Platonova L.V., Shono N.I., Chevokin A.Y., Sakevarashvili G.R., Abakumova O.Y., Tsvetkova T.A., Kondakova L.I. Thermostable hepatocyte growth factor and energy metabolism in rats after partial hepatectomy. Bull. Exp. Biol. Med. 1999; 127 (1): 47–49. DOI: 10.1007/BF02432798.Гальперин Э.И., Атауллаханов Р.И., Дюжева Т.Г., Платонова Л.В., Мельникова Т.М., Монаков М.Ю., Дудченко А.М., Люндуп А.В., Клабуков И.Д. Возможности биологической комбинации, полученной из растущей печени, для ее восстановления при токсическом повреждении (экспериментальное исследование). Биомедицинская химия. 2017; 63 (5): 440–446. DOI: 10.18097/PBMC20176305440.Galperin E.I., Ataullakhanov R.I., Dyuzheva T.G., Platonova L.V., Melnikova T.M., Monakov M.Yu., Dudchenko A.M., Lyundup A.V., Klabukov I.D. Possible use of the growing liver biological set for hepatic recovery after toxic damage (an experimental study). Biomeditsinskaya khimiya. 2017; 63 (5): 440–446. (In Russian)Гальперин Э.И., Дюжева Т.Г., Абакумова О.Ю., Платонова Л.В. Способ получения вещества, стимулирующего регенерацию поврежденной печени. Патент РФ на изобретение №2548750 /17.02.2014. Бюл. №11-2015.Galperin E.I., Dyuzheva T.G., Abakumova O.Yu., Platonova L.V. Sposob poluchenija veshhestva, stimulirujushhego regeneraciju povrezhdennoj pecheni [Method for producing substance stimilating injured liver repair]. Patent RUS №2548750/17.02.2014. Byul. №11-2015. (In Russian)Rasulov M.F., Vasilchenkov A.V., Onishchenko N.A., Krasheninnikov M.E., Kravchenko V.I., Gorshenin T.L., Pidtsan R.E., Potapov I.V. First experience in the use of bone marrow mesenchymal stem cells for the treatment of a patient with deep skin burns. Bull. Exp. Biol. Med. 2005; 139 (1): 141–144. DOI: 10.1007/s10517-005-0232-3.Rasulov M.F., Vasilchenkov A.V., Onishchenko N.A., Krasheninnikov M.E., Kravchenko V.I., Gorshenin T.L., Pidtsan R.E., Potapov I.V. First experience in the use of bone marrow mesenchymal stem cells for the treatment of a patient with deep skin burns. Bull. Exp. Biol. Med. 2005; 139 (1): 141–144. DOI: 10.1007/s10517-005-0232-3.Куимов А.Н., Жожикашвили А.С., Никифорова А.И., Манских В.Н., Платонова Л.В., Шоно Н.И., Савицкая Е.Е., Батин М.А., Дюжева Т.Г. Влияние экстракта из растущей печени на пролиферацию гепатоцитов (экспериментальное исследование). Анналы хирургической гепатологии. 2012; 17 (4): 66–74.Kuimov A.N., Zhozhikashvili A.S., Nikiforova A.I., Manskikh V.N., Platonova L.V., Shono N.I., Savitskaya E.E., Batin M.A., Dyuzheva T.G. Influence of the growing liver extract on the hepatocyte proliferation (experimental investigation). Annaly khirurgicheskoy gepatologii = Annals of HPB surgery. 2012; 17 (4): 66–74. (In Russian)Chen J., Larochelle A., Fricker S., Bridger G., Dunbar C.E., Abkowitz J.L. Mobilization as a preparative regimen for hematopoietic stem cell transplantation. Blood. 2006; 107 (9): 3764–3771.Chen J., Larochelle A., Fricker S., Bridger G., Dunbar C.E., Abkowitz J.L. Mobilization as a preparative regimen for hematopoietic stem cell transplantation. Blood. 2006; 107 (9): 3764–3771.Tanaka M., Miyajima A. Liver regeneration and fibrosis after inflammation. Inflamm. Regen. 2016; 36: 19. DOI: 10.1186/s41232-016-0025-2.Tanaka M., Miyajima A. Liver regeneration and fibrosis after inflammation. Inflamm. Regen. 2016; 36: 19. DOI: 10.1186/s41232-016-0025-2.Michalopoulos G.K. Liver regeneration after partial hepatectomy. Critical analysis of mechanistic dilemmas. Am. J. Pathol. 2010; 176 (1): 2–13. DOI: 10.2353/ajpath.2010.090675.Michalopoulos G.K. Liver regeneration after partial hepatectomy. Critical analysis of mechanistic dilemmas. Am. J. Pathol. 2010; 176 (1): 2–13. DOI: 10.2353/ajpath.2010.090675.Kiess W., Gallaher B. Hormonal control of programmed cell death/apoptosis. Eur. J. Endocrinol. 1998; 138 (5): 482–491.Kiess W., Gallaher B. Hormonal control of programmed cell death/apoptosis. Eur. J. Endocrinol. 1998; 138 (5): 482–491.Yi X., Song M., Yuan Y., Zhang X., Chen W., Li J., Tong M., Liu G., You S., Kong X. Hepatic stimulator substance alleviates toxin-induced and immune-mediated liver injury and fibrosis in rats. Dig. Dis. Sci. 2012; 57 (8): 2079–2087. DOI: 10.1007/s10620-012-2168-6.Yi X., Song M., Yuan Y., Zhang X., Chen W., Li J., Tong M., Liu G., You S., Kong X. Hepatic stimulator substance alleviates toxin-induced and immune-mediated liver injury and fibrosis in rats. Dig. Dis. Sci. 2012; 57 (8): 2079–2087. DOI: 10.1007/s10620-012-2168-6.Li F., Ma N., Zhao R., Wu G., Zhang Y., Qiao Y., Han D., Xu Y., Xiang Y., Yan B., Jin J., Lv G., Wang L., Xu C., Gao X., Luo S. Overexpression of miR-483-5p/3p cooperate to inhibit mouse liver fibrosis by suppressing the TGF-β stimulated HSCs in transgenic mice. J. Cell. Mol. Med. 2014; 18 (6): 966–974. DOI: 10.1111/jcmm.12293.Li F., Ma N., Zhao R., Wu G., Zhang Y., Qiao Y., Han D., Xu Y., Xiang Y., Yan B., Jin J., Lv G., Wang L., Xu C., Gao X., Luo S. Overexpression of miR-483-5p/3p cooperate to inhibit mouse liver fibrosis by suppressing the TGF-β stimulated HSCs in transgenic mice. J. Cell. Mol. Med. 2014; 18 (6): 966–974. DOI: 10.1111/jcmm.12293.Kumar S., Wang J., Rani R., Gandhi C.R. Hepatic deficiency of augmenter of liver regeneration exacerbates alcohol-induced liver injury and promotes fibrosis in mice. PLoS One. 2016; 11 (1): e0147864. DOI: 10.1371/journal.pone.0147864.Kumar S., Wang J., Rani R., Gandhi C.R. Hepatic deficiency of augmenter of liver regeneration exacerbates alcohol-induced liver injury and promotes fibrosis in mice. PLoS One. 2016; 11 (1): e0147864. DOI: 10.1371/journal.pone.0147864.Jiang S.J., Li W., An W. Adenoviral gene transfer of hepatic stimulator substance confers resistance against hepatic ischemiareperfusion injury by improving mitochondrial function. Hum. Gene Ther. 2013; 24 (4): 443–456. DOI: 10.1089/hum.2012.219.Jiang S.J., Li W., An W. Adenoviral gene transfer of hepatic stimulator substance confers resistance against hepatic ischemiareperfusion injury by improving mitochondrial function. Hum. Gene Ther. 2013; 24 (4): 443–456. DOI: 10.1089/hum.2012.219.Zhang J., Li Y., Jiang S., Yu H., An W. Enhanced endoplasmic reticulum SERCA activity by overexpression of hepatic stimulator substance gene prevents hepatic cells from ER stressinduced apoptosis. Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2014; 306 (3): 279–290. DOI: 10.1152/ajpcell.00117.2013.Zhang J., Li Y., Jiang S., Yu H., An W. Enhanced endoplasmic reticulum SERCA activity by overexpression of hepatic stimulator substance gene prevents hepatic cells from ER stressinduced apoptosis. Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2014; 306 (3): 279–290. DOI: 10.1152/ajpcell.00117.2013.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.